Veterinarski specijalistički institut „Kraljevo“ osnovan je pod nazivom Epizootiološko-dijagnostička stanica „Kraljevo“, a u skladu sa programom razvoja republičke epizootiološke službe u Republici Srbiji. Poslovna jedinica EDS „Kraljevo“ počela je rad u okviru Veterinarskog instituta u Beogradu, OOUR-a Centar za epizootiologiju, dijagnostiku i zoonoze.[/cq_vc_timelinecard_item][cq_vc_timelinecard_item date=“1983.“ title=“April 1983. godine“]Urađena analiza uslova za izdvajanje EDS „Kraljevo“ u OOUR „Međuregionalni veterinarski zavod Kraljevo“.[/cq_vc_timelinecard_item][cq_vc_timelinecard_item date=“1984.“ title=“Jun 1984. godine“]EDS „Kraljevo“ menja status u OOUR u okviru Veterinarskog instituta u Beogradu.[/cq_vc_timelinecard_item][cq_vc_timelinecard_item date=“1988.“ title=“Februar 1988. godine „]OOUR Međuregionalni veterinarski zavod u Kraljevu izdvaja se iz sastava Veterinarskog instituta u Beogradu i postaje samostalna RO Međuregionalni veterinarski zavod u Kraljevu.[/cq_vc_timelinecard_item][cq_vc_timelinecard_item date=“1992.“ title=“1992. godine“]Naziv Veterinarski specijalistički institut “Kraljevo“ datira od 1992. godine . Donošenjem Zakona o izmenama i dopunama zakona o zdravstvenoj zaštiti životinja („Sl.glasnik“ RS br.50/92), menja se status i osniva Veterinarski specijalistički institut “Kraljevo“ sa sedištem u Kraljevu za područje: Kraljeva, Aleksandrovca, Brusa, Varvarina, Vrnjačke Banje, Gornjeg Milanovca, Kruševca, Lučana, Sjenice, Ivanjice, Novog Pazara, Raške, Ražnja, Trstenika, Tutina, Ćićevca, Čačka, Užica, Arilja, Nove Varoši, Bajine Bašte, Kosjerića, Požege, Priboja, Prijepolja i Čajetine.[/cq_vc_timelinecard_item][/cq_vc_timelinecard]
S obzirom na narastajući epizootiološko epidemiološki problem bruceloze među stanovništvom Kosova i Metohije i nepostojanja veterinarske laboratorije na ovom prostoru ovim Zakonom, kao područje rada VSI „Kraljevo“ definiše se i deo teritorije Kosova i Metohije, i to: Kosovo Polje, Vučitrn, Vitina, Glogovac, Gnjilane, Kačanik, Lipljan, Novo Brdo, Obilić, Priština, Srbica, Uroševac, Štimlje, Štrpce, Prizren Gora, Dečani, Đakovica, Istok, Klina, Opolje, Orahovac, Peć, Suva Reka, Zubin Potok, Leposavić, Zvečan i Kosovska Mitrovica. 10.05.1993. godine doneta je odluka o osnivanju Epizootiološko-dijagnostičke stanice u Prištini – Kosovu Polju u okviru VSI „Kraljevo“. Na teritoriji Kosova i Metohije VSI „Kraljevo“ je obavljao specijalističku veterinarsku delatnost u periodu od 1992. do 1999. godine.
Danas, status Veterinarskog specijalističkog instituta definisan je na osnovu Zakona o izmenama i dopunama Zakona o zdravstvenoj zaštiti životinja („Sl.glasnik“ RS br.50/92) istovetan je i 2010. godine, sa izuzetkom dela tada definisane teritorije. Od 1999. godine područje Kosova i Metohije više nije u nadležnosti VSI „Kraljevo“. VSI „”Kraljevo“ je jedna od 12 specijalističkih veterinarskih ustanova u mreži specijalističke službe Republike Srbije. Ustanova je javna po svojoj funkciji, osnovana od strane Narodne Skupštine Republike Srbije, a Vlada imenuje Upravni odbor i direktora. Imovina VSI „Kraljevo“ je vlasništvo države 100%, a ustanova posluje na dohodovnom principu.